2023年5月25日，中國科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院彭廣敦課題組在Nature methods上發(fā)表了題為Simultaneous profiling of spatial gene expression and chromatin accessibility during mouse brain development的研究論文。文章揭示了一種名為MISAR-seq的空間多組學(xué)技術(shù)(Microfluidic indexing-based spatial assay for ATAC and RNA-sequencing）。該技術(shù)通過微流控芯片依賴的靶向barcode遞送系統(tǒng)，在保留細(xì)胞空間位置信息的前提下同時(shí)實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞內(nèi)ATAC和RNA兩種組學(xué)信息的捕獲，并成功將其應(yīng)用在了胚胎期小鼠腦發(fā)育機(jī)制的研究中，不僅首次構(gòu)建出了小鼠腦發(fā)育的時(shí)空多組學(xué)圖譜，同時(shí)也揭示了啟動(dòng)子及增強(qiáng)子形成的順式調(diào)控元件在腦發(fā)育中的具體調(diào)控機(jī)制。

　　單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)已經(jīng)可以實(shí)現(xiàn)一次性獲取同一細(xì)胞內(nèi)的多個(gè)組學(xué)信息，但也伴隨著其空間位置信息丟失，空間組學(xué)技術(shù)技術(shù)不僅可以很好地保留細(xì)胞原位的空間位置信息，還可以同時(shí)捕獲細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄組信息。但是，目前的空間組學(xué)技術(shù)主要局限于單個(gè)組學(xué)信息的捕獲。如果能夠開發(fā)出一種在同一組織中同時(shí)捕獲多個(gè)組學(xué)信息的空間多組學(xué)技術(shù)，將其用于捕獲人體內(nèi)的所有細(xì)胞，并構(gòu)建出單細(xì)胞分辨率的三維數(shù)字化人，將會(huì)極大的幫助我們解析人類細(xì)胞的時(shí)空譜系及相關(guān)調(diào)控機(jī)制，從而更好的服務(wù)于人體衰老和疾病的治療。

　　MISAR-seq具有同時(shí)在一個(gè)空間位置樣本上分析RNA與ATAC信息的能力。因此，研究人員特別關(guān)注了E11.0、E13.5、E15.5及E18.5的多個(gè)胚胎期小鼠腦的發(fā)育。首先，研究人員驗(yàn)證了MISAR-seq的數(shù)據(jù)質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)基于空間雙組學(xué)的ATAC及RNA數(shù)據(jù)與其相應(yīng)單組學(xué)數(shù)據(jù)的質(zhì)量接近甚至更好，每個(gè)單元數(shù)據(jù)點(diǎn)所檢測(cè)到的基因數(shù)大致在2500-3500之間。進(jìn)一步和單細(xì)胞數(shù)據(jù)的整合分析顯示，該技術(shù)所捕獲到的腦細(xì)胞類型與相應(yīng)單細(xì)胞的腦結(jié)構(gòu)注釋也非常吻合。

　　接下來，研究人員將具有不同發(fā)育時(shí)期且包含兩種組學(xué)信息小鼠腦發(fā)育數(shù)據(jù)進(jìn)行了整合分析，并開發(fā)了基于空間位置限制與圖像特征提取結(jié)合的生物信息學(xué)工具，有效提高了不同組學(xué)在多個(gè)不同時(shí)期點(diǎn)之間數(shù)據(jù)的“橫向”與 “縱向”整合能力，從而繪制出了小鼠腦發(fā)育的時(shí)空多組學(xué)圖譜。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，無論是單獨(dú)使用MISAR-seq ATAC或RNA數(shù)據(jù)，或者是同時(shí)使用兩種組學(xué)數(shù)據(jù)（Combined）進(jìn)行空間聚類均能較好的進(jìn)行腦區(qū)劃分，且聚類結(jié)果與Allen Brain Atlas的注釋均較為一致。

　　最后，基于已獲得的MISAR-seq數(shù)據(jù)，研究人員通過繪制兩種組學(xué)在皮層發(fā)育的空間和時(shí)間的軌跡，嘗試進(jìn)一步解釋皮層發(fā)生過程中染色質(zhì)開放與基因表達(dá)之間的級(jí)聯(lián)調(diào)控關(guān)系。研究人員發(fā)現(xiàn)Pax6-Eomes-Tbr1形成的直接級(jí)聯(lián)調(diào)控建立了小鼠皮層發(fā)生過程中基因表達(dá)的順序和區(qū)域特異性。這些結(jié)果表明，多組學(xué)的時(shí)空軌跡分析可以較好的預(yù)測(cè)決定細(xì)胞命運(yùn)的重要驅(qū)動(dòng)元件，并且可以提供TF的具體相互作用模式，從而對(duì)諸如皮層等復(fù)雜結(jié)構(gòu)的形成施加精確的調(diào)控。

　　下一步，研究人員期待MISAR-seq能在空間分辨率以及三維組織解析上得到進(jìn)一步的優(yōu)化和拓展，且能夠兼容更多的組學(xué)信息，并基于此開發(fā)更好的空間多組學(xué)基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析工具，從而揭示驅(qū)動(dòng)結(jié)構(gòu)復(fù)雜組織中細(xì)胞身份和功能決定的具體機(jī)制。

　　研究團(tuán)隊(duì)主要由來自中國科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院、生物島實(shí)驗(yàn)室、廣州實(shí)驗(yàn)室的人員組成。博士生江伏青，錢瑩瑩、朱淼及實(shí)習(xí)研究員周鑫等人為該論文的共同第一作者，彭廣敦研究員為論文的通訊作者。研究工作還得到了廣州實(shí)驗(yàn)室崔桂忠研究員、昆明理工大學(xué)陳凱研究員的幫助。

　　論文鏈接

　　圖1. MISAR-seq的數(shù)據(jù)質(zhì)量

　　圖2. E11.0, E13.5, E15.5 和E18.5小鼠腦的空間基因表達(dá)、染色質(zhì)可及性以及結(jié)合二者的空間圖譜